乙酰胆碱酯酶即真性胆碱脂酶主要来自胎儿的兴奋性细胞,反应神经系统成熟度。胎儿神经管闭合缺损(如开放性脊柱裂)及开放性腹壁缺陷时,羊水中假性胆碱酯酶增加(PchE)。两者可通过同时测定羊水中PCHE活性并算出羊水ACHE/PchE比值来区分,具有很高的科研意义。
检测原理:
乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase)水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸,胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB(对称三硝基苯,Sym-Trinitrobenzene)黄色化合物,根据颜色深浅进行比色定量,水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶的活力。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约30分钟,可测60例左右样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
3、再现性好:变异系数CV=1.5%。
4、回收试验: X =97%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可测动物血清(浆)、组织,效果均佳。
试剂组成及配制(50T/24 样):
试剂一:标准品,粉剂×3 支,4°C保存 6 个月。
1μmol/ml 标准品应用液配制:取标准品一支加生理盐水 10ml 混匀,现用现配。
试剂二:底物,粉剂×2 支,4°C保存 6 个月。
底物缓冲液配制:用时每支粉剂加生理盐水 20ml,制备成底物缓冲液,4°C保存两周。
试剂三:显色剂贮备液,3ml×1 支,4°C保存 6 个月。
显色应用液配制:用时按照显色剂贮备液:生理盐水=1︰9 稀释,配成显色应用液。
按需配制,也可一次配制 30ml,避光冷藏 3 个月。
试剂四:抑制剂,液体 2ml×1 支。打开后装在空的小塑料瓶内(附空瓶一只),室温保存 6个月。
试剂五:透明剂,液体 6ml×1 支,室温保存 6 个月。天冷时会有沉淀或混浊,须在 37°C水浴加热至透明后方可使用。
生理盐水:60ml×2 瓶,室温保存 6 个月。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为412nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、按步骤加入样本和R2、R3
2、漩涡混匀,37℃孵育6分钟
3、加入R4、R5、R6,室温静置15分钟
4、412nm波长,0.5cm光径,比色
储存条件:
本试剂盒保存期:6个月。贮存温度:2~8℃。