测定原理:
NOS 催化 L-Arg 和分子氧反应生成 NO,NO 与亲核性物质生成有色化合物,在 530nm波长下测定吸光度,根据吸光度的大小可计算出 NOS 活力。
NOS 主要有两种类型:即结构型(cNOS)和诱导型(iNOS)。结构型(cNOS)主要存在于神经元和内皮细胞内,依赖钙;诱导型(iNOS)主要存在于巨噬细胞内,不依赖钙。根据此原理可以分型。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约30分钟,可测50例左右样本。
2、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效,部分试剂-20℃保存。
3、再现性好:变异系数CV=1.7%。
4、回收试验: X =103.3%。
5、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
6、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织以及各种水产,效果均佳。
试剂组成与配制(50 管/24 样 A014-1-1):
试剂一:底物缓冲液 6ml2 瓶,-20ºC 以下避光冷冻保存 3 个月。临用前化冻摇匀。没有用完的试剂,可以-20ºC 以下避光冷冻保存以备下次再用。
试剂二:促进剂淡黄色或白色粉剂3 支,稀释液 0.6 ml3 支。-20ºC 以下冷冻保存 6 个月。测试前取稀释液一支 0.6ml 加入一支粉剂中充分混匀(即将 1.5ml 小离心管反复颠倒,并将小离心管尖部的液体弹下来),测试后剩余试剂可放入-20ºC 以下冷冻保存,时间不超过一周。若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色,则不可以再用。
试剂三:显色剂(黄色)6ml1 瓶,4ºC 避光冷藏保存 3 个月。
试剂四:透明剂 6ml1 瓶,室温保存 6 个月。天冷后会凝固,37°C水浴变澄清时再使用。
试剂五:终止剂 60ml2 瓶,4ºC 保存 6 个月。室温低会出现浑浊,37°C水浴至透明再用。
试剂六:液体 10ml×1 瓶,4°C保存 6 个月。用前请仔细观察,如有结晶附着在瓶壁或瓶底,可将试剂连同瓶子一起在 90~100°C热水中摇晃等其完全溶解后,即可使用。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计(比色测定波长为530nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器