BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离 子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,一个 Cu+螯合二个BCA分子,工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物,最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
测定原理:
碱性条件下,蛋白将 Cu2+还原为 Cu+, Cu+与 BCA 试剂形成紫色的络合物,562nm 处有最大吸收峰,依据吸光度与浓度成正比,通过测吸光度即可计算待测蛋白的浓度。
产品优点:
1、操作简单,快速,45分钟内完成测定,比经典的Lowary法快4倍且更加方便;
2、准确灵敏:试剂稳定性好,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-2000μg/ml。
3、经济实用,除试管外,测定可用微板法操作,大大节约样品取样量。
4、抗试剂干扰能力比较强,如去垢剂,尿素等均无影响。
试剂组成及配制(50 管/48 样 A045-3-1):
试剂一:粉剂×1 支,稀释液,12.5ml×1 瓶,4°C冷藏密封保存 6 个月。
试剂一应用液的配制:取试剂一粉剂 1 支与试剂一稀释液 1 瓶混匀,溶解完全后 4°C待用。
试剂二:250μl×1 支,4°C冷藏密封保存 6 个月。
工作液的配制:按试剂一应用液:试剂二=50∶1 的比例配制,混匀后待用,用多少配多少。
试剂三:终止剂贮备液 10ml×1 瓶,4°C冷藏密封保存 6 个月。
终止剂应用液的配制:取终止剂贮备液用双蒸水 5 倍稀释后备用,4°C冷藏。
试剂四:蛋白标准:524μg/ml 蛋白标准液 0.2ml×1 支。4°C保存 1 个月。
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为562nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、漩涡混匀器
4、微量移液器