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莱氏无胆甾原体PCR试剂盒
莱氏无胆甾原体PCR试剂盒图片
包装:50次


产品名称
Acholeplasma laidlawii PCR Kit
产品介绍

产品及特点
莱氏无胆甾原体属于柔膜体纲,支原体目,无胆甾原体科,无胆甾原体属。
莱氏无胆甾原体最初分离自污水、肥料、腐土质、土壤和植物组织,后来人们发现在牛生殖道和鼻腔、猪鼻腔、人口腔、鸡窦等各种哺乳动物和鸟类中均发现其寄生现象。莱氏无胆甾原体也是常见的污染细胞的支原体之一。本产品是根据 PCR原理开发的莱氏无胆甾原体检测试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。
2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增莱氏无胆甾原体。
3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次,但只能用于科研。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
PCR  Magic Mix 3.0908051  mL(红盖)
超纯水1009351  mL(亮黄色)
莱氏无胆甾原体 PCR引物混合液13-75400yw100  μL(白盖)
莱氏无胆甾原体 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)60908-75400pc50  μL(黄盖)
使用手册13-75400sc1份

运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其
他试剂。

自备试剂
样品 DNA。

使用方法
一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品,则需要做 N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL莱氏无胆甾原体 PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分N+2个样品管PCR阴性对照PCR阳性对照
PCR  Magic Mix 3.0各 20  μL20  μL20  μL
莱氏无胆甾原体 PCR引物混合液各 2  μL2  μL2  μL
N+2个样品 DNA模板各 18  μL不加不加
PCR阴性对照(水)不加18  μL不加
PCR阳性对照(莱氏无胆甾原体 PCR阳性对照的10000倍稀释液)不加不加18  μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃30  sec
PCR反应(35个循环)55℃30  sec
PCR反应(35个循环)72℃30  sec
最后延伸72℃10  min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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