注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

锰过氧化物酶(EC 1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。锰过氧化物酶在Mn₂+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。

产品内容：

试剂一：液体75ml×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体5ml×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体10ml×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体5ml×1瓶，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、酶液提取

1、组织：按照质量(g)：试剂一体积(ml)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g，加入1ml试剂一)加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

2、细胞：按照细胞数量(104个)：试剂一体积(ml)为500～1000：1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

3、培养液或其它液体：直接检测。

二、测定操作

三、酶活计算公式

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T= 83×△A÷Cpr

2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/g)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T= 83×△A÷W

3．按照细胞数量计算

酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/10⁴cell)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 83×△A÷细胞数量

4．按照液体体积计算

酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。

MnP活性(nmol/min/L)=△A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T= 8.3×10⁴×△A

ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1ml；V样：反应中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，10min。