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FS Mix
FS Mix图片
品牌:东盛
产地:广州


包装与价格:
订货号纯度规格包装价格(元)
P207140次,50 μl体系/次1 ml-
P2072200次,50 μl体系/次1 ml×5-
产品名称
FS Mix 快速高效PCR预混和溶液
产品介绍

产品组分

 P2071
 2×FSTM Mix 1ml 1支
 超纯水 1ml 1支
 P2072
 2×FSTM Mix 1ml 1支×5
 超纯水 1ml 1支×5

注: 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
 
保存条件
    -20℃保存2年。
    请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。
 
产品说明
    FSTM Mix是2×浓缩的快速高效PCR预混和溶液,含有FSTM Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。FSTM Mix的反应体系经特殊优化,减少引物二聚体的形成,显著提高PCR扩增的特异性。同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。
    FSTM Taq DNA 聚合酶 是东盛根据蛋白工程原理,以Taq DNA 聚合酶为基础研发的新型DNA聚合酶。本产品具备类似KOD酶快速扩增能力,延伸速度可达3 kb/min,是普通Taq DNA 聚合酶的3倍,可缩短一半以上的PCR扩增时间。同时具备普通Taq DNA 聚合酶扩增效率高、适应性广等优点。
 
产品特点
    高特异性
    使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
    快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
    可重复:降低污染和加样错误风险
 
产品用途
    高特异性PCR检测
    高通量PCR检测
    高重复性PCR检测
    制备TA克隆用的PCR产物
 
活性定义
    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
 
质量控制
    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。
 
应用举例
注:以下反应举例为25 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
 
以λDNA为模板,扩增1kb片段。

 λ DNA(2.5 ng/μl) 0.5μl      
 引物1 (10 μM) 1 μl
 引物2 (10 μM) 1 μl
 2×FSTM Mix 12.5 μl
 超纯水 补足至25 μl

 
PCR反应条件
  多数模板的快速扩增条件

 94℃ 4 min
 94℃ 30 sec
 55~68℃ 30 sec  30 Cycles
 72℃ 20 sec
 72℃ 2 min

 
  1kb简单模板的快速扩增条件

 95℃ 3min
 95℃ 15 sec
 55~68℃ 15 sec  30 Cycles
 72℃ 20 sec
 72℃ 2 min

注:由于1 kb简单模板的二级结构简单,且长度较短,可同时缩短变性、退火时间至15 s,以实现快速扩增。
 
注意事项
    1、使用本产品时,引物、模板、dNTP用量跟普通PCR Mix的一样,为实现快速扩增,请尽量选用小体反应体系。
    2、退火温度一般为TM-5℃或TM-8℃,稍低的退火温度有利于实现快速扩增。
    3、延伸时间视片段长度而定。一般情况,≤500 bp目的片段延伸15 s;500 bp-1 kb目的片段延伸20 s;>1 kb目的片段,延伸时间按 20s/kb计算,如1.5 kb目的片段延伸30 s、3 kb目的片段延伸60 s。
    4、FSTM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上一个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
    5、建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
    6、50μl PCR反应体系中模板DNA推荐用量

 人类基因组DNA 0.1μg------1μg
 λDNA 0.5ng--------5ng
 质粒DNA 0.1ng------10ng
 大肠杆菌DNA 10ng-----100ng

 
Q&A
问:使用FSTM Mix 扩增时是否需要使用快速PCR扩增仪?
答:不需要,使用普通的PCR扩增仪即可。
问:FSTM Mix 的使用与普通PCR Mix 有何不同?
答:使用方法与普通Taq Mix 基本相同,只需注意扩增条件中时间适当缩短。
问:FSTM Mix 扩增产物是否可用于TA克隆?
答:FSTM Taq DNA 聚合酶 没有3-5外切酶活性,所以PCR产物末端带 A,可进行TA克隆。

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