产品组分

注： 本产品份体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
 
保存条件
    -20℃避光保存2年。
    请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。
 
产品说明
    SYBR Green qPCR Mix是2×浓缩的实时定量PCR扩增的预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液、酶抗体、SYBR® Green I等扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染(加样次数减少)。利用特异性的酶抗体封闭低温条件下Taq DNA聚合酶的活性，防止形成非特异性扩增。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Corbett、Bio-Rad和Roche。
    Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/分钟(70-75 ℃)。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。
    SYBR® Green Ⅰ是一种结合于DNA双螺旋小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后，其荧光大大增强。这一性质使其用于PCR扩增产物的检测非常理想。SYBR® GreenⅠ的最大吸收波长约为497 nm，发射波长最大约为520 nm。在PCR体系中，只有掺入DNA双链的SYBR® GreenⅠ才能发射强荧光信号，而不掺入链中的SYBR® Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。
 
产品特点
    特异性高：热启动功能与优化缓冲液可防止非特异性扩增和形成引物二聚体。
    敏感性：可检测低拷贝模板。
    线性范围广：可精确定量9个数量级。
    通用性好：几乎兼容所有实时荧光定量PCR仪。
    可重复性、使用方便：即用型2×Mix，减少加样错误和反应体系配制时间。
 
产品用途
    实时PCR(使用YBR® Green Ⅰ)
    实时RT-PCR(使用YBR® Green Ⅰ)
 
质量控制
    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；功能测试：qPCR分析扩增的特异性、敏感性与可重复性。
 
2×SYBR Green qPCR Mix的组分
    100 mM KCl
    4 mM MgCl₂
    400 µM dNTP混合物
    0.2 U/µl Taq DNA聚合酶
    dd H₂O等
 
应用举例
注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
 
反应体系

 
反应条件

×32-45个循环
 
备注：
    1、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入实时荧光定量PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
    2、因本产品含有SYBR® Green I，使用或保存时避免长时间强光照射。
    3、配制反应液的过程中，请用新的枪头、离心管，以免交叉污染。
    4、反应体系中引物、模板的用量，请根据实际情况优化。同时，本产品附带的MgCl2方便调整体系镁离子的浓度。
    5、本品与ABI产品的使用程序有一定差异，使用时请重新调整程序，达到良好的特异性及灵敏度。
    6、模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)