有机磷或氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的活性具有抑制作用，通过测定该酶的活性被抑制的程度即可知样品中含有农药的残留情况。计算公式：抑制率(%)=(ΔA0-ΔAi)/ ΔA0×100%

检测对象：粮食、蔬菜、水果、肉、蛋、奶、水产品等

检测原理：有机磷或氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的活性具有抑制作用，通过测定该酶的活性被抑制的程度即可知样品中含有农药的残留情况。

试剂配制

① 缓冲液：将缓冲液试剂袋中的试剂倒出，溶于500ml 蒸馏水中，溶解、混匀即可。

② 底物：按需添加的底物量，向标有“底物”的试剂瓶中加入蒸馏水溶解、混匀即可。0～5℃环境下冷藏保存。

底物添加量为20ul时，应往标注为底物的瓶中加入2.7ml蒸馏水；

底物添加量为100ul时，应往标注为底物的瓶中加入13ml蒸馏水。

③ 显色剂：无需配制放入冰箱冷藏（0～5℃），切勿冷冻结冰。

④ 酶试剂：酶试剂已配成溶液可直接使用。平常要在0～5℃环境条件下冷藏保存，切勿冷冻至结冰！！！

操作步骤

1.样品前处理：

(1)

①植株：称取2g样品（叶菜剪成宽度为1厘米的菜样，块根菜取1厘米左右的表皮样品）放入三角瓶中，加入10ml缓冲液后，振荡提取2分钟；

②茶叶：称取0.5g茶叶样品，加入5ml丙酮，振荡提取5分钟；取0.2ml上述丙酮溶液，40～50℃水浴蒸干；加入2.5ml缓冲液，振荡2分钟；（自备丙酮）

(2) 若浸提液清澈无色或颜色较浅，取上清液待测；

若浸提液混浊，离心，取上清液待测；

若浸提液色素干扰严重，可用活性炭脱色，具体方法如下：

将浸提液转移至另一个三角瓶中，加入0.1～0.5g活性碳(根据颜色深浅调整)，水浴70℃加热5分钟，取出趁热过滤，滤液待测。

[备注]：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）浸提，避免次生物物质干扰。

2.检测样品的制备：

(1) 空白对照液:

①取酶100ul，缓冲液2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀静置10分钟后，再加入显色剂100ul。

②加入底物20ul（或100ul）。

③摇匀后立即测试。

(2) 检测样品液:

①取酶100ul，待测样品液2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀静置10分钟后，再加入显色剂100ul。

②加入底物20ul（或100ul）。

③摇匀后立即测试。

3 检测样品测试：

(1) 空白对照测量：

① 取2.5ml对照样品于比色皿中；

② 将比色皿放入指定的通道中；

③ 按“对照”键，屏幕下方显示测量时间；

④ 检测结束后，仪器自动显示对照样品的测试结果△A0。

[备注]：a 当空白对照值在0.15-0.3之间时，可继续做实验；

b 当空白对照值在＜0.15时，需重做空白对照，若重复多次的空白对照值＜0.15时，必须更换酶试剂。

c 当空白对照值在＞0.3时，要调试减少仪器的测量时间，重新做空白对照。

(2) 样品测量：

① 取2.5ml待测样品于比色皿中；

② 将比色皿放入指定的通道中；

③ 按“样品”键，屏幕下方显示测量时间；

④ 检测结束后，仪器自动显示指定通道检测样品的测试结果△Ai。

判断标准

(1) 样品的抑制率在40～50%之间为可疑农残超标样品；

(2) 抑制率＞50%为农残超标样品，表明被测样品的农药残留毒性可能超过安全的界定标准，建议用气相色谱等仪器分析法作进一步确认。

注意事项

① 加入底物后，应迅速混匀，立即测试。

② 测试前根据需添加底物的量对底物进行稀释。

③ 所用的检测液对皮肤均具有不同程度的伤害，使用时请做好防护。不慎沾到皮肤应立即擦干并用大量水冲洗。

检测试剂请务必在2～4℃冰箱保存。