HphI
产品介绍
- 符合省时酶(Time-Saver™)标准,可在 5-15 分钟内完成酶切
- 在 rCutSmart™ 缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列,并在识别序列之外进行切割。
- 限制性内切酶酶切位点:GGTGA(8/7)
产品来源
大肠杆菌菌株,携带来自副溶血嗜血杆菌( Haemophilus parahaemolyticus)(ATCC 49700)的 HphI 基因。
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37℃ 1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 50%
NEBuffer™ r2.1: 50%
NEBuffer™ r3.1: <10% rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性 贮存溶液
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
500 µg/ml Recombinant Albumin
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25℃ 热失活
65℃ for 20 minutes
甲基化敏感性 dam 甲基化: 阻断酶切 dcm 甲基化: 阻断酶切
CpG甲基化: 不敏感 同裂酶 AsuHPI
- 注意事项
- 有人提出 HphI 可能在 N9/N8 处切割,具体取决于识别位点和切割位点之间的序列(Kang, C. and Wu, C.-W. (1987) Nucl. Acids Res. 15, 2279-2294; Cho, S.-H. and Kang, C. (1990) Mol. Cells 1, 81?86.)。在 ΦX174 DNA 上,使用 > 12 个单位的酶,温育时间超过 4 小时,会产生额外的切割产物。在其它 DNA 上,尚未出现此现象。低 pH 值和高甘油浓度会增强这种活性。
- dcm 甲基化阻断该酶酶切。如需了解更多信息,请参阅 Dam-Dcm 和 CpG 甲基化。
- 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性
- 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性
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