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U0126-EtOH

品牌
J&K
CAS
1173097-76-1
货号
1759173
规格纯度
98%, 一种高度选择性的MEK1/2抑制剂
参考价格
1158 *本价格含增值税费
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服务
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数量
-+
产品名称:
1173097-76-1
U0126-EtOH
产品介绍:

基本信息

分子式C18H16N6S2·C2H6O
分子量426.56
存储条件Freezer -20℃

产品描述

U0126-EtOH是一种高度选择性的MEK1/2抑制剂,无细胞试验中IC50为0.07 μM/0.06 μM,作用于ΔN3-S218E/S222D MEK的亲和力比PD098059强100倍。

靶点(IC50 & Targe)

CDK2,>10μM

CDK4,>10μM

MEK1,0.07μM

MEK2,0.06μM

PKC,>10μM

体外研究

与MEK抑制剂PD098059(IC50为10 μM)相比,U0126高亲和力(高100多倍)作用于重组组成型激活的突变MEK1 (DN3-S218E/S222D),IC50为72 nM。与PD98059类似, U0126 非竞争性抑制MEK,说明 U0126结合在MEK的特定位点上。与作用于多种其他激酶,如PKC, Abl, Raf, MEKK, ERK, JNK, MKK-3, MKK-4/SEK, MKK-6, Cdk2, 和Cdk4相比,U0126 更显著高选择性作用于MEK1和MKE2。U0126 作用于TPA刺激的细胞,通过阻断 MAPK信号传递,显著抑制c-Fos和c-Jun mRNA的上调及蛋白水平,抑制达50-80%,导致AP-1转录活性受抑制,IC50为0.96 μM。[1]10 μM U0126通过抑制 ERK2而不是ERK1磷酸化,显著抑制细胞死亡。[2] 根据对ERK 和mTOR-p70S6K通路的同时抑制,U0126选择性抑制贴壁非依赖性Ki-ras-转化的大鼠成纤维细胞生长,也抑制组成型激活ERK, MDA-MB231和HBC4的肿瘤细胞系生长。[3]

体内研究

U0126 作用于携带脑贫血-再灌注的CA1 锥体细胞的沙鼠,降低ERK1/2磷酸化,和随后的神经元死亡,这种作用存在剂量依赖性。U0126 按200 μg/kg剂量作用于局灶性脑缺血小鼠,显著降低 42%梗塞体积,也降低 41% 脑萎缩。[2]U0126按~30 mg/kg剂量腹腔注射给药患过敏性哮喘的小鼠,具有显著的抗炎效果,这种作用存在剂量依赖性,通过抑制 IL-4, IL-5, IL-13, eotaxin, VCAM-1, 全部IgE和OVA特定的IgE和IgG1。[4]

激酶实验

体外激酶实验:

使用重组组成型激活的突变MEK-1 (DN3-S218E/S222D) 或组成型激活的 MEK-2(S222E/S226D)进行实验。使用 96孔 硝化纤维素过滤装置测量反应速度。在酶浓度为 10 nM时,在20 mM Hepes, 10 mM MgCl2, 5 mM β-巯基乙醇, 0.1 mg/mL BSA, pH 7.4, 中室温下进行反应。加入γ-33PATP到预混合的U0126反应混合物中开始反应,每6分钟采集100 μL等分样,然后转移到含50 mM EDTA 的96孔硝化纤维模板上,阻止反应进行。提取模板,使用buffer 在真空下冲洗4次。使用30 μL Microscint-20 闪烁液填满每孔,使用Top Count 闪烁计数器测定33P-磷酸化的ERK的放射性。从放射性对时间曲线获得反应速度。ERK和 ATP浓度分别为400 nM和40 μM。数据绘制成抑制百分数,通过非线性最小二乘回归,根据 Langmuir 等温方程测定IC50值。

细胞实验

Cell lines: MCF-7, MDAMB453, SKBR3, ZR75-1, BSY1, HBC4, HBC5, 和 MDA-MB231

Concentrations: 溶于DMSO,终浓度为~50 μM

Incubation Time: 24, 48, 或96小时

Method: 为了测量贴壁非依赖性生长,细胞按每孔 5000 个细胞接种在聚HEMA包被的96孔板上,体积为135 μL。加入培养基稀释的15 μL 不同浓度U0126,然后细胞培养96小时。加入15 μL MTT 溶液(5 mg/mL,溶于 PBS),再温育4小时。加入 100 μL SDS溶液 (20% ,溶于10 mM HCl), MTT甲臜被溶解,24小时后,在570 nm 处测量吸光值,然后使用酶标仪在 690 nm处测定参考波长。为了测定DNA 片段,细胞接种在聚HEMA包被或未包被的组织培养塑料 35-mm盘上,然后温育24小时。使用U0126处理细胞24-48小时,使用PBS冲洗,然后使用10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 10 mM EDTA,和0.5% Triton X-100溶解。在10,000 g转速下离心10分钟,分离低分子量DNA片段。使用20 μg/mL RNase A处理含等量蛋白的上清液1小时,然后使用 20 μg/mL蛋白酶 K在37oC下处理30分钟。使用2-丙醇沉淀DNA,在2%琼脂糖凝胶上跑胶,然后通过SYBR Green I 染色观察。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 携带双侧颈总动脉闭塞(BCAO)诱导脑部缺血的雄性沙土鼠,携带大脑中动脉闭塞(MCAO) 诱导局灶性脑缺血的雄性ICR或ddY小鼠

Formulation: 溶于DMSO,然后在0.1 M PBS中稀释

Dosages: ~400 μg/kg

Administration: 静脉注射

(Only for Reference)

参考文献

[1] Duncia JV, et al. Bioorg Med Chem Lett. 1998, 8(20), 2839-2844.

[2] DeSilva DR, et al. J Immunol. 1998, 160(9), 4175-4181.

[3] Freeman MR, et al. Cancer Biol Ther. 2011, 12(11), 966-977.

[4] Droebner K, et al. Antiviral Res. 2011, 92(2), 195-203.

[5] Ashabi G, et al. Behav Brain Res. 2012.

[6] Favata MF, et al. J Biol Chem. 1998, 273(29), 18623-18632.

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