细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

ARHGAP35 (Rho GTPase-activating protein 35) ELISA KITMouse HIF2a(Hypoxia Inducible Factor 2 Alpha) ELISA Kit2-(Boc-氨基)-2-甲基-1-丙醇全组织冯库萨（VON KOSSA）钙染色试剂盒

GFOD1 (Glucose-fructose oxidoreductase domain-containing protein 1) ELISA KITMouse GnRH(Gonadotropin Releasing Hormone) ELISA Kit2-(Boc-氨基)-2-甲基-1-丙醇石蜡切片茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒

GBGT1 (Globoside alpha-1,3-N-acetylgalactosaminyltransferase 1) ELISA KITMouse ADAMTS5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5) ELISA Kit尼罗红冻切片茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒

LGALSL (Galectin-related protein) ELISA KITMouse TWEAK(Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit4-Boc-氨基哌啶细胞茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒

GPR37L1 (Prosaposin receptor GPR37L1) ELISA KITMouse PLA2G1B(Phospholipase A2) ELISA Kit4-Boc-氨基哌啶全组织茜素红（ALIZARIN RED S）钙染色试剂盒

GLMN (Glomulin) ELISA KITMouse Calprotectin(Calprotectin) ELISA Kit头孢硝噻吩石蜡切片摩罗利（MALLORY/PERLS）铁（三价）染色试剂盒

GPR65 (Psychosine receptor) ELISA KITMouse 15-LO/LOX(15-lipoxygenase) ELISA Kit氮基三乙酸冻切片摩罗利（MALLORY/PERLS）铁（三价）染色试剂盒

ARHGAP35 (Rho GTPase-activating protein 35) ELISA KITMouse IL-17α(Interleukin 17 alpha) ELISA Kit新戊二醇石蜡切片特恩布尔（TURNBULL）铁（二价）染色试剂盒

SCaBER(膀胱鳞癌细胞)PREB ELISA KitBAZ/ACF1  溴区结构域相邻锌指蛋白1A抗体碲酸赖氨酸脱羧酶肉汤

PRKCDBP ELISA KitFAS/Apo-1/CD95  载脂蛋白1抗体Triphenylphosphine gold triflimide乳糖发酵管

PRKAR2B ELISA KitCPE  胰羧肽酶E抗体Triphenylphosphine gold triflimide氨基酸脱羧酶对照

LALBA(Alpha-lactalbumin) ELISA KitMyotilin  肌收缩蛋白MYOT抗体Triphenylphosphine gold triflimide尿素酶

PRELID1 ELISA KitPMCA  细胞膜钙转运ATP酶抗体氟化锡(II)甘露醇发酵管

DHH(Desert hedgehog protein) ELISA KitGABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基丁酸受体α3抗体氟化锡(II)半固体琼脂

PPP4R2 ELISA KitNCEH/AADACL1  中性胆固醇酯水解酶1抗体氟化锡(II)色氨酸肉汤

PRKG2 ELISA KitRab25  癌基因RAS相关蛋白Rab25抗体氟化锡(II)乳糖发酵管