羊特定基因序列PCR检测试剂盒实验注意事项：

1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；

2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；

3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。

4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

产品名称：羊特定基因序列PCR检测试剂盒

英文名称：详见说明书

编号：GOY-M1528

分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

产品说明书                                   1份

它具有下列特点：

1. 一管式操作，用户只需要提供样品即可。

2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物，能专一性检测出样品中的大豆成分，但不能检测其他非大豆成分。

3. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。

5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%，对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL。

6. 本只能用于科研，足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。

GPBB/PYGB  脑糖原磷酸化酶抗体10-脱乙酰巴卡亭

SLC27A6/ACSVL2  脂肪酸转运蛋白6抗体知母皂苷BII

Hexokinase II/HxK2  己糖激酶2抗体知母皂苷A3

SIRT5  沉默调节蛋白5抗体白当归素

SLC2A4RG/GLUT4 enhancer factor  葡萄糖转运蛋白4增强因子抗体去氢钩藤碱

TNNI3K  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶TNN13K抗体异去氢钩藤碱

HAND1  心脏和神经嵴衍生蛋白1抗体麦冬皂苷D

HEXIM1/EDG1  雌激素下调基因1蛋白抗体巴西苏木素

HEY2  转录因子HEY2蛋白抗体细叶远志皂苷

HOPX/LAGY  肺癌相关蛋白Y抗体丁溴酸东莨菪碱
羊特定基因序列PCR检测试剂盒水仙甙；异鼠李素3OβD芸香糖苷；异鼠李素3O芸香糖苷5(6)羧基罗丹明110（混合物）5mg

1011850Agarase100 units猪血管活性肠肽(VIP)免疫试剂盒

28543079DNA Polymerase I500 units猪旋毛虫IgG免疫试剂盒

 30462341DNA Polymerase I2500 units猪胸腺肽β4（Thymosin β4）免疫试剂盒

58559Klenow Fragment300 units猪心型脂肪酸结合蛋白(FABP3/FABP11/MDGI)免疫试剂盒

20736098Klenow Fragment1500 units猪心钠肽(ANP)免疫试剂盒

 Klenow Fragment, LC300 units猪心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)免疫试剂盒

58558080T4 DNA Polymerase100 units猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)免疫试剂盒

58316419T4 DNA Polymerase500 units猪酰基辅酶A去饱和酶(SCD)免疫试剂盒
设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。