iPS人诱导多能细胞

规格：1×10⁶ cells/管

活细胞运输：收到细胞后，请立即放入培养箱中培养；

冻存细胞运输：可暂存于-80℃冰箱或液氮长期储存。

产品简介： 

iPS人诱导多能细胞产品是利用病毒载体将四因子系统(Oct4、Sox2、 Klf4 、c-Myc)转入皮肤成纤维细胞（成年女性）将其诱导重编程为iPS细胞，且对iPS细胞进行分化及干细胞marker鉴定。该产品采用埃泽思生物的人多能干细胞培养基（AC-1001000/AC-1001001）进行细胞培养与传代。本产品经检测人iPS细胞无细菌、真菌、霉菌、支原体污染。

产品组成：

实验材料

H1人胚胎干细胞系（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-2001002）

H9人胚胎干细胞系（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-2001003）

人多能干细胞培养基（Applied Cell^TM: Cat. no. AC-1001000）

Advance人多能干细胞培养基（Applied Cell^TM: Cat. no. AC-1001001）

即用型基质胶（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-1001007）

人多能干细胞消化液（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-1001008）

Serum-Free干细胞冻存液（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-1001011/1001012）

磷酸缓冲盐溶液(Phosphate Buffer Saline，PBS)

操作方法（以下步骤皆应在无菌条件下操作）

iPS人诱导多能干细胞复苏操作：

1. 实验操作步骤：

1.1  基质胶包被培养板：取出6孔板/12孔板，每孔内加入1 mL/0.5 mL即用型基质胶（AC-1001007），轻轻晃动6孔板/12孔板使基质胶完全覆盖皿底，置于37℃培养箱中孵育1h~2h，实验前拿出并置于超净工作台/生物安全柜中室温下平衡20min。如果暂时不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 储存，并于1周内使用。

注意：①一支冻存的干细胞的数量在1×10⁶cells/mL左右，对应6孔板1孔；②即用型基质胶对温度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接触碰基质胶液面所及的瓶身，影响基质胶质量。

1.2  先将2~3mL的干细胞培养基加入15mL离心管中备用。

1.3  解冻：将从液氮中取出的冻存管快速浸入37℃温水中，快速摇动，使其在1~2min内快速解冻；

注意：细胞从液氮中拿出的速度要快，尽量减少其暴露在室温中的时间。

1.4  离心：冻存管中的冻存液解冻后，将其逐滴加入含有干细胞培养基的15mL离心管中，将15mL离心管置于低速离心机中配比平衡后，1000rpm离心3min；

1.5  重悬：离心后弃上清加1mL人多能干细胞培养基对干细胞沉淀进行吹吸混匀，吹吸3~5次左右。

1.6  接种：吹吸均匀后，将已经平衡好的即用型基质胶弃掉，将吹打均匀的干细胞悬液加入到已经包被好的6孔板中，并补全每孔2mL培养体系。

1.7  培养：接种后的6孔板可以置于倒置相差显微镜下观察接种的干细胞密度以及细胞团块大小，呈4个细胞以上的团块较合格，水平十字轻轻晃动6孔板/12孔板使细胞均匀分布。并置于37℃，5% CO₂的恒温培养箱培养，第2天观察细胞贴壁情况；

1.8  换液：从复苏的时间开始每24h换液一次。

注意：因培养基中活性成分只足够维持一天，所以每24h应及时更换新鲜培养基。