免费会员第11
访问量: 70742   网址: www.cnreagent.com/show1046573    在线留言 
首页 >> 技术文章 >> 单增李斯特氏菌单重荧光PCR检测试剂盒试剂准备
产品搜索
单增李斯特氏菌单重荧光PCR检测试剂盒试剂准备
2020.07.23   点击485次

单增李斯特氏菌单重荧光PCR检测试剂盒试剂准备


1. DNA模板


2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)


3.10×PCR Buffer


4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM


5.Taq酶操作步骤 


1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。


      10×PCR buffer             5μl


      dNTP mixl                 4μl


       引物1(10pM)               2μl


       引物2(10PM)              2μl


       Taq酶(2U/μl)            1μl


      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl


      加ddH2O至               50 μl


    视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。


2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。


3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。


4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。


产品分类