人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒实验原理

人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被兔脂肪酸合成酶（FAS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔脂肪酸合成酶（FAS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

二、人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒产品优势

1. 品种齐全、质量可靠、灵敏度高、稳定性好、操作简便

2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

4.同城（上海）需要代测可免费上门取样，享送货上门的服务。

5.根据客户需求可以根据客户的要求定制ELISA试剂盒。

6.润裕生物可提供全方位的售前、售中、售后技术支持,为您解决实验过程中遇到的问题。

三、人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒标本要求

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

四、人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

12孔×8条

无

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

无

样本稀释液

6mL

3mL

无

检测抗体-HRP

10mL

5mL

无

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

无

底物B

6mL

3mL

无

终止液

6mL

3mL

无

封板膜

2张

2张

无

说明书

1份

1份

无

自封袋

1个

1个

无

五、人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒操作流程

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

六、人28S抗核糖体抗体(28S rRNP)科研elisa试剂盒注意事项

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 封板膜只限一次性使用，避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。底物请避光保存

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。