溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活。因此,该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
溶菌酶主要由吞噬细胞合成并分泌的一种粘性蛋白,属乙酰多糖酶。存在于唾液、乳液泪液和鼻及气管等分泌物中,能溶解革兰氏阳性细菌。由于它的高等电点(PH
11),使它能与细菌牢固结合,并水解细菌细胞壁肽聚糖,使细菌裂解死亡。测定其在血清、体液或分泌物中的含量及其变动情况可作为了解机体防御功能的一个侧面指标。
检测原理:
在一定浓度的混浊菌液中,由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低,透光度增强,故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。
产品优点如下:
快速简便:全程约2分钟,可测4例左右样本(自身对照法)。
取样量微:本法取样本量约100ul。
稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
再现性好:变异系数CV=1.7%。
回收试验: X =96%。
受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
测试面广:可测动物血清(浆)、唾液、乳液、泪液和气管分泌物以及各种水产品等。
试剂组成:
试剂一:菌粉,5mg×4 支,2~8°C干燥保存,有效期 6 个月。
试剂二:菌粉溶剂,100ml×1 瓶,2~8°C保存,并每月放微波炉中温消毒 20 秒,有效期 6个月。
试剂三:标准品,粉剂 2mg×1 支(活力为 8 万单位/mg),2~8°C干燥保存,有效期 6 个月。
[注]:试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年。
试剂配制:
(1)、贮备菌液的配制:
取 5mg/支的菌粉 1 支,倒入匀浆管中,加菌粉溶剂 1ml,轻轻缓慢上下旋转研磨3 分钟(切勿溅出),即为贮备菌液,将其取出后置 2~8°C冰箱密封保存一周左右。
(2)、应用菌液的配制:
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19 进行配制,需多少配多少。剩下的应用菌液 2~8°C可保存一周左右。**是现用现配,用时摇匀。
(3)、标准品的配制:
①、标准品贮备液的配制:每支准确加双蒸水 1.0ml 配成 2mg/ml 的标准品贮备液。2~8°C可保存 7~10 天。
②、标准品应用液的配制:临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799 比例稀释成 2.5μg/ml(即 200U/ml)的标准品应用液,需多少配多少。2~8°C保存,可保存 7~10 天
所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计(比色测定波长为530nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
储存条件:
本试剂盒保存期:6个月。贮存温度:2~8℃。