特性：

Eca-109(食管癌细胞)安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

HIBADH (3-hydroxyisobutyrate dehydrogenase, mitochondrial) ELISA KITRat SGLT2(Sodium/glucose cotransporter 2) ELISA KitFmoc-D-缬氨酸组织乙醛脱氢酶3活性荧光定量检测试剂盒

BCKDK ([3-methyl-2-oxobutanoate dehydrogenase [lipoamide]] kinase, mitochondrial) ELISA KITRat NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA KitN,N`-二苯基硫脲血液乙醛脱氢酶3活性荧光定量检测试剂盒

ZSCAN5A ELISA KitRat NT-3(Neurotrophin 3) ELISA Kit2,5-降片二烯钯(II)二氯化物细胞乙醛脱氢酶4活性比色法定量检测试剂盒

TRPV1(Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1) ELISA KitRat PDGF-AB(Platelet-Derived Growth Factor AB) ELISA KitNε-苄氧羰基-L-赖氨酸组织乙醛脱氢酶4活性比色法定量检测试剂盒

HYAL1(Hyaluronidase-1) ELISA KitRat Rantes(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA KitNε-苄氧羰基-L-赖氨酸血液乙醛脱氢酶4活性比色法定量检测试剂盒

ZW10 ELISA KitRat GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA KitNε-苄氧羰基-L-赖氨酸细胞3－羟－3－甲戊二酰辅酶A（HMG－COA）还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒

ZWINT ELISA KitRat TGFBI(Transforming Growth Factor Beta Induced Protein) ELISA KitN-氨基甲酰甲基乙磺酸组织3－羟－3－甲戊二酰辅酶A（HMG－COA）还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒

DHCR24 (Delta(24)-sterol reductase) ELISA KITRat TGF-β2(Transforming Growth Factor Beta 2) ELISA KitN-氨基甲酰甲基乙磺酸血液3－羟－3－甲戊二酰辅酶A（HMG－COA）还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒

OVCA2 ELISA KitKDEL (ER Marker)  赖氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，亮氨酸相关序列抗体三甲基铝紫云英苷进口/国产Mucin 4/Muc4  粘蛋白-4抗体含量：HPLC≥98%

OVCA1 ELISA KitRAG1/RNF74  环指蛋白74抗体（重组激活基因1）三甲基铝对叶百部进口/国产BKCA alpha  钙激活通道蛋白α抗体含量：HPLC≥98%

OVOL1 ELISA KitPOMC  阿黑皮素原抗体三甲基铝仙茅苷进口/国产HSPB2  热休克蛋白B2抗体含量：HPLC≥98%

OXA1L ELISA KitFBXL11  FBXL11蛋白抗体磷酸三乙酯(R型)人参皂苷Rh2进口/国产phospho-CD19(Ser227)  酸化CD19抗体含量：HPLC≥98%

Osteoglycin ELISA KitASAP1/DDEF1  发育分化增强因子1抗体无水磷酸三钠白花前胡进口/国产CD8  CD8抗体含量：HPLC≥98%

HABP1/C1QBP(Hyaluronan Binding Protein 1) ELISA Kitphospho-ER-beta(ser87)  磷酸化雌激素受体β抗体无水磷酸三钠白花前胡进口/国产CD8 alpha  CD8抗体含量：HPLC≥98%

OXA1L ELISA Kitphospho-ASAP1/DDEF1(Tyr782)  磷酸化发育分化增强因子1抗体2,4,6-三氨基嘧啶贝母辛进口/国产Adiponectin Receptor 1  脂联受体1抗体含量：HPLC≥98%

OSTF1 ELISA KitRAG2  重组激活基因2蛋白抗体2,4,6-三氨基嘧啶地奥司明进口/国产Salmonella typhimurium  鼠伤寒沙门氏菌含量：HPLC≥98%

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。