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人成纤维细胞无血清培养基
人成纤维细胞无血清培养基图片
货号:AC-1001015
品牌:埃泽思生物
包装:500 mL
交货期:2-3天
产地:上海


产品介绍

人成纤维细胞无血清培养基

产品基本信息

产品名称

Applied CellTM人成纤维细胞无血清培养基

货    号

AC-1001015

规    格

500mL

运输保存条件

基础培养基2-8℃,添加剂-20--80

使用范围

人真皮//心脏等多种组织器官来源成纤维细胞培养

保质期

12个月

 

产品简介

    人成纤维细胞无血清培养基埃泽思生物科技公司Applied CellTM)自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维细胞原代分离、扩增与传代培养,且不含动物血清,内毒素水平低于药典标准(<0.06EU/mL)。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。

产品特性

无外源动物蛋白成分,大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

全程无血清生产,极大降低批次间差异。

可用于原代分离。

内毒素<0.06EU/ml,远低于中国药典水平。

组分

规格

数量

运输

人成纤维细胞基础培养基

 

450mL

1

冰袋

成纤维细胞添加剂

50mL

1

干冰

产品内容

操作方法

人成纤维细胞传代培养:

人成纤维细胞培养基配制

1.1 37快速解冻成纤维细胞培养基添加剂,快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质,时间大致为10min待添加剂融化后摇匀,分装或直接按比例添加到基础培养基中,分装后添加剂立即储存于-20-80℃,避免反复冻融

1.2将添加剂10%比例加入人成纤维细胞基础培养基混匀,即为人成纤维细胞培养基AC-1001015混合后培养基可在2-8 稳定储存2-3,不建议使用已配制超过3周的培养基。

1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。

 

操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

人成纤维细胞复苏(10cm dish)

2.1  从液氮-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞,迅速放入37℃水浴快速融解。

2.2 在生物安全柜或超净台中,将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的成纤维细胞培养基AC-1001015

2.3 1000rpm 离心3 min,吸掉上清,加入10ml成纤维细胞培养基重悬细胞。

2.4 将细胞均匀铺到培养皿中,水平十字振动培养皿使细胞均匀分布,5% CO237℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。

2.5 24h后更换新鲜成纤维细胞培养基继续培养,每2-3更换培养液

人成纤维细胞传代培养

1. 在显微镜下观察细胞当细胞融合度达到90%,即可传代。

2. 在超净台/安全柜中,吸掉原有培养基,加入PBS溶液洗一次,加入Xeno-Free细胞消化液(AC-1001024/1001025使之完全覆盖皿/瓶底

3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化

4. 加入消化液2倍体积的成纤维细胞培养基用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心3 min

6. 弃上清,加入成纤维细胞培养基,重悬细胞,计数。12-14比例传代,或按2-5x104 cells/cm2  传代均匀铺在培养皿/瓶中,置于37℃5%CO2 培养箱中培养。

注意:人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关,所以传代时细胞密度不宜过稀

人成纤维细胞冻存

1.  细胞达到90%汇合度, 吸掉原有培养基PBS清洗一次

2. 加入Xeno-Free细胞消化液AC-1001024/1001025使之完全覆盖皿/瓶底,室温孵育4-5min37℃孵育2-4min分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化

3. 加入消化液2倍体积的成纤维细胞培养基用移液轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。

4.   将细胞悬液转移到15 mL离心管中1000 rpm离心3 min,吸掉上清。

5. 加入适量Serum-free细胞冻存液AC-1001005/1001006,调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右,每支冻存管分装1.5-2ml

6. 直接放入-80℃24h入液氮中长期保存。

 

质量控制

 

指  标

澄清

颜色

培养基为红色,添加剂为橙黄色

pH

7.0-7.4

渗透压 mOsmol/kg

280-330

EU/ml

培养基

<0.06

添加剂

<0.06

细菌,真菌

0.1μm过滤,无菌检测合格

支原体

0.1μm过滤,支原体检测为阴性,

细胞生长试验

形态

细胞为梭形,呈指纹状或旋涡状生长

细胞生长试验

合格


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上海埃泽思生物科技有限公司
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联系人: 吴经理
地址: 上海市宝山区园丰路69号联东粤浦科技园1号楼
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