- 符合省时酶(Time-Saver™)标准,可在 5-15 分钟内完成酶切
- 在 rCutSmart™ 缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- 限制性内切酶酶切位点:G/AWTC
产品来源
大肠杆菌菌株,携带有克隆自丝状栖热菌(
Thermus filiformis)(来自伦敦大学学院的 D. Cowan)的 TfiI 基因。
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,65℃ 下,1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at65℃
1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 50%
NEBuffer™ r2.1: 100%
NEBuffer™ r3.1: 100%
rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性
贮存溶液
10 mM Tris-HCl
250 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50% Glycerol
0.15% Triton® X-100
pH 7.4 @ 25℃
热失活
否
甲基化敏感性
dam 甲基化: 不敏感
dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切
同裂酶
PfeI
在不同温度下的活性
@37℃: 10% - 注意事项
- 哺乳动物基因组 DNA 的酶切被某些 CpG 甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切。
- 对于不能热失活的酶,我们建议进行柱纯化(如 Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒),或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收(建议使用 Monarch DNA 胶回收试剂盒),或酚/氯仿抽提。