• 在 rCutSmart^™ 缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 酶切需要两个或两个以上识别位点。请查看下表中的酶列表和使用建议以及背景信息文章。
• 限制性内切酶酶切位点：GG/CGCC

产品来源

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内酶切 1 µg pXba DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 100%
  NEBuffer™ r2.1: 100%
  NEBuffer™ r3.1: 10%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 阻断酶切

  同裂酶

  DinI
  EgeI
  EheI
  KasI
  Mly113I
  PluTI
  SfoI
  SspDI
  

• 注意事项
  1. NarI 是 KasI 的同裂酶。NarI 产生一个 2 碱基 5´ 突出末端，而 KasI 产生一个 4 碱基 5´ 突出末端。
  2. 表现出标记位点偏好性，在 pBR322 上 548 bp 位置的 NarI 位点处，酶切十分缓慢。
  3. 在标准的限制性酶切条件下，NarI 需要两个位点进行高效酶切。但是，如使用过量的酶，则可能实现单个位点的酶切。对于包含单个 NarI 位点的底物，建议对每 1 ug 的 DNA 底物使用 20 个单位的酶。或者，可以使用异裂酶 SfoI。SfoI 没有像 NarI 那样表现出强烈的位点偏好。
  4. 该酶在切割某些超螺旋质粒时活性较低，酶切 1 μg 质粒 DNA 需要超过 1 个单位的酶量。如需完全酶切 1 μg 质粒 DNA，请采用我们推荐的酶切方案。
  5. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  6. 酶切需要两个或两个以上识别位点。请查看下表中的酶列表和使用建议以及背景信息文章。
  7. CpG 甲基化阻断酶切。