紫外-可见分光光度法主要适用于不饱和共轭体系化合物的鉴定。定性鉴别对仪器要求高,要常校正,样品纯度可靠。
利用紫外光谱对有机化合物进行定性鉴别的主要依据是多数有机化合物具有特征吸收光谱,如吸收光谱的形状、吸收峰的数目、各吸收峰的波长位置和相应的吸收系数等。定性分析方法常用比较法,结构完全相同的化合物应具完全相同的吸收光谱和特征数据。但由于紫外吸收光谱比较简单,仅与分子结构中发色团、助色团等可产生吸收的官能团有关,不能表征分子的整体结构,所以具有相同的吸收光谱的化合物不一定是同一个化合物。定性鉴别方法有以下几种。
一、比较吸收光谱
若两个样品是同一物质,其吸收光谱应完全一致,利用这一特性,将试样与已知对照品用同一溶液配制成相同浓度的溶液,分别测定其吸收光谱,然后比较它们的吸收光谱特征,比较光谱图是否完全一致,还可以利用文献所记载的标准图谱进行核对。如果两个吸收光谱完全一致,则可能是同一化合物,如果两者有差别,则肯定不是同一种化合物。
二、比较吸收光谱的特征数据
特征值:λmax λmin λsh ε或百分吸收系数
最大吸收波长λmax是最长用于鉴别的光谱特征数据。若样品化合物有多个吸收峰,并存在谷或肩峰,应同时作为鉴别依据。
具有相同或不同集团的不同化合物,可能有相同的λmax,但由于它们的相对分子质量不同,所以吸收系数存在差别,可用作鉴别依据。如安宫黄体酮和炔诺酮,两者最大吸收波长相同,但吸收系数存在差别。
三、比较吸光度(或吸收系数)比值
有些化合物,存在两个以上的吸收峰,可利用在不同吸收峰(或峰与谷)处测定的吸光度比值A1/A2作为鉴别的依据。由于测定所用的溶液浓度相同,吸光度比值即为吸收系数比值,(由A=Ecl可得出,c与l相同)。